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质粒提取的原理？
强碱性条件下，质粒DNA和基因组DNA同时从细胞中释放出来，并发生变性。
在pH中性，并有高盐浓度存在的条件下，质粒DNA会迅速发生复性，仍为可溶性状态，染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构，在去垢剂SDS作用下，染色体DNA与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀，通过离心去除沉淀后，再用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA，用异丙醇或乙醇沉淀可将之纯化出来。
切割目的基因和质粒的注意事项？
切割目的基因和质粒是基因工程实验中的关键步骤。以下是在切割目的基因和质粒时需要注意的一些事项：
1. 工具酶选择：根据目标基因和质粒的性质选择合适的限制性内切酶。常用的限制性内切酶有EcoR I、BamH I、Hind III等。
2. 质粒准备：在切割质粒之前，确保质粒已经正确提取、纯化和转化。正确操作可以避免质粒被污染，从而提高切割效果。
3. 酶切位点分析：在切割之前，确定目的基因和质粒上的正确酶切位点。可以使用限制性内切酶预测工具（如PAGE或Primer Premier）进行分析。
4. 酶切温度和时间：根据所选限制性内切酶的特性，选择合适的酶切温度和时间。确保在适当的条件下进行酶切，以获得最佳效果。
5. 酶切产物纯化：酶切完成后，需要对酶切产物进行纯化。可以使用凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳或高效液相色谱等方法进行分离和纯化。
6. 质粒DNA提取：将纯化后的酶切产物用于质粒DNA的提取。选择适当的提取方法和试剂，以确保提取的质粒DNA质量良好。
7. 克隆和转化：将提取的质粒DNA用于目的基因的克隆和转化。确保使用正确的转化方法，并注意无菌操作。
8. 下游实验：在切割和转化成功后，进行后续实验，如PCR、酶切鉴定和基因表达分析等。
9. 实验操作：在整个实验过程中，遵循实验室规定和操作规程，确保实验环境安全和生物安全。
10. 数据分析：在实验完成后，对结果进行详细分析，评估切割和转化效果。如有需要，可以调整操作条件以优化实验效果。
DNA如何进一步提纯？
一般来说，OD比小于1.8的话是有残余蛋白，小于1.7的话这里面东西DNA就不多了，很可能是裂解液有问题，碱性裂解液较强烈，一般没问题，可以参考分子克隆里提取质粒的方法配制裂解液，如果你不死心的话，先可以用你提的东西跑个电泳看下，看有没有基因组，有的话那就用DNA凝胶提取试剂盒吧。。
提取RNA的详细步骤？
分子克隆技术（华农）实验一 质粒的制备质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术。质粒的提取方法很多，大多包括3个主要步骤：细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒DNA的分离和纯化。本实验以碱裂解法为例，介绍质粒的抽提过程。实验目的：掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试剂的作用。实验材料：含有质粒pUC18载体的大肠杆菌菌液，克隆有水稻外源片段的BAC的大肠杆菌菌液。 实验原理：在pH 12.0 ~ 12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清中，然后用酚、氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。实验步骤：
1. 取含有pUC18质粒的大肠杆菌菌液于LA培养基上37℃过夜培养；
2. 用无菌牙签挑取单菌落，接种于含有Amp抗生素的LB培养基中，37℃摇床~250 r/min过夜培养；3. 吸取1.5 ml菌液，12000 g离心2分钟，收集菌体，倒掉菌液；吸取1.5 ml菌液，再次收集菌体，尽量将菌液倒干净；4. 加入300 ml溶液 I振荡打匀，重新悬浮细胞，震荡混匀（注意：应彻底打匀沉淀或碎块）； （剧烈）
5. 加入300 ml溶液II，轻柔颠倒混匀，放置至清亮，一般不超过5分钟；6. 加入300 ml溶液III颠倒混匀，放置于冰上10分钟，使杂质充分沉淀；（温和）
7. 12000 g离心10分钟；8. 吸取800 ml上清液（注意：不要吸取到飘浮的杂质）至另一Eppendorf管中，加入2/3体积的异丙醇，室温下放置5分钟；9. 12000 g 常温离心15分钟；
10. 倒尽上清，加75％乙醇浸洗除盐（放置片刻或离心3分钟后倒去上清）；11. 室温放置或超净台上风干DNA；12. 加40 ml灭菌超纯水或TE溶解；13. 质粒、BAC的质量检测，于-20℃保存。附注：质粒检测电泳检测：质粒电泳一般有三条带，分别为质粒的超螺旋、开环、线型三种构型吸光值检测：采用分光光度计检测260nm、280nm波长吸光值，若吸光值260nm/280nm的比值介于1.7－1.9之间，说明质粒质量较好，1.8为最佳，低于1.8说明有蛋白质污染，大于1.8说明有RNA污染。实验二 DNA的琼脂糖凝胶电泳带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。电泳的种类多，应用非常广泛，它已成为分子生物学技术中分离生物大分子的重要手段。琼脂糖凝胶电泳由于其操作简单、快速、灵敏等优点，已成为分离和鉴定核酸的常用方法。实验目的：掌握琼脂糖凝胶电泳的原理，学习琼脂糖凝胶电泳的操作。实验材料：质粒DNA、BAC、植物总DNA
质粒提取各溶液组分的作用？
solution1就是提供一个裂解菌体的溶液～有一些蛋白质变性剂去垢剂葡萄糖做调解渗透压的作用～
solution2就是碱性的致使核酸（基因组DNA加质粒DNA）发生变性的溶液～solution3就是用来中和2的碱性的溶液～使得质粒可以复性而基因组DNA则不能～所以经离心就可以把质粒分离开来了～
