本文目录
- 质粒DNA提取和细胞基因组DNA提取的异同？
- 为什么在质粒提取后,跑电泳时会出现一到三条带?请尽量回答得详细些？
- 质粒dna跑电泳应该出多少条带？
- 我们选用从霍乱弧菌中分离出来的质粒做载体，可以吗?为什么？
- 质粒扩增的步骤？
质粒DNA提取和细胞基因组DNA提取的异同？
质粒小，复性容易， 而染色体DNA大 ，不易复性；这导致两种DNA提取采用完全不同的策略。
质粒dna提取，为了区分于DNA，都采用首先从混合物中分离出来，然后逐步纯化；而染色体DNA提取的策略则为逐步去除其他杂质，最后剩下的就是DNA了。质粒DNA提取方法有几种，最常见的碱裂解法利用碱变形（加溶液II）后用醋酸溶液快速复性（溶液III），这样使得质粒DNA可以复性而溶解，而GenomeDNA不能复性而沉淀，从而将他们分开。
而后面的纯化如除蛋白（酚 、氯仿），除盐（75%酒精），沉淀（酒精、异丙醇等）两者类似。当然两者都有很粗略的简易提法，那就完全大相径庭啦。
为什么在质粒提取后,跑电泳时会出现一到三条带?请尽量回答得详细些？
正常质粒是闭合的双链DNA。
在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。
这三种形态电泳时的分离率不同，分离速度不同，分成三带。
闭环（超螺旋），开环，线形的螺旋率依次降低
质粒dna跑电泳应该出多少条带？
3条。用试剂盒这种、或者提取时候操作比较好的、同时菌也摇的比较密的，一般抽提出来的质粒跑电泳是可以看到3条带的，他们从上到下分别是开环、线性、负超螺旋的质粒。
主要原因是琼脂糖凝胶电泳是根据分子在电场中的迁移速率来区分不同大小的DNA的，但这有一个局限性，就是凝胶本身是存在空间位阻的，同一个质粒上述3种不同的结构。
虽然在碱基数量上完全相同，但在空间结构上，负超螺旋最小，在电泳中迁移速率最快，因而跑在前面，开环因为空间位阻最大因而跑的最慢。扩展资料：一般来讲，金属氢氧化物、金属氧化物等胶体微粒吸附阳离子，带正电荷；非金属氧化物、非金属硫化物等胶体微粒吸附阴离子，带负电荷。
因此，在电泳实验中，氢氧化铁胶体微粒向阴极移动，三硫化二砷胶体微粒向阳极移动。
利用电泳可以分离带不同电荷的溶胶。
例如，陶瓷工业中用的粘土，往往带有氧化铁，要除去氧化铁，可以把粘土和水一起搅拌成悬浮液，由于粘土粒子带负电荷，氧化铁粒子带正电荷，通电后在阳极附近会聚集出很纯净的粘土。
工厂除尘也用到电泳。
利用电泳还可以检出被分离物，在生化和临床诊断方面发挥重要作用。
本世纪40年代末到50年代初相继发展利用支持物进行的电泳，如滤纸电泳，醋酸纤维素膜电泳、琼脂电泳；50年代末又出现淀粉凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
我们选用从霍乱弧菌中分离出来的质粒做载体，可以吗?为什么？
霍乱弧细菌本身对生物体是有害的，如果从霍乱弧菌中获取质粒，必需大量的获得霍乱弧菌，这样可能会出现危险！
质粒扩增的步骤？
扩增流程及步骤：
? ? ? ? ?收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
? ? ? ? 1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养）
? ? ? ? ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
? ? ? ? ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
? ? ? ? ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
? ? ? ? ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；
（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
? ? ? ? ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（如果菌落过多，请将质粒稀释后再转化。如果无菌落，请加入10μl质粒离心全涂转化）
? ? ? ? ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
? ? ? ? 2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期30天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
? ? ? ? 3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
? ? ? ? 4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
? ? ? ? 5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期30天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
如需要大题好的质粒，可以下单备注。
