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PCR反应退火温度的高低与什么因素有关呢？
有主带，还有非特异性带，这时需要适当提高退火温度；如果连主带都没有就适当降低退火温度 PCR在长沙乃至湖南的临床运用真的不多 除了湘雅开展了PCR 其他三甲医院都没 中心和省人医的还在筹建中 其中中心的预留了实验室 也有相应的人员 不过实验室并未对外开展 生检中运用PCR的话 费用比较高 就目前来说不实用 卫检中看省疾控能否开展
做pcr，如何确定最佳退火及延伸的时间和温度？
退火的目的是为了使引物和DNA单链结结合，所以退火温度一定要低于目的DNA和引物的熔点温度。
一般情况下引物的熔点温度为40~70度，熔点温度的高低与引物的大小与G+C的比例有关。延伸的温度取决于DNA聚合酶的最适温度，聚合的错配率，引物的熔点温度。最常使用的延伸温度为72度。但是根据你要扩增的产物与引物还是会有差距。pcr程序的温度和时间怎么决定？
一般而言，pcr仪会提供一个标准推荐程序。而pcr试剂盒一般都会提供一个推荐优化程序，如变性温度94～98℃，延长温度65～72℃，保存温度4～15℃，等等。至于退火温度和延长时间则需要根据所用引物，扩增产物大小，聚合酶最佳活性温度确定。退火温度一般为引物平均tm—3～5℃。延长时间一般1～2kb/分钟。
pcr及电泳的基本原理？
PCR及电泳技术的基本原理类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引 物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合 物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。
rna退火为何要升温？
退火温度是影响PCR反应特异性的重要因素。
引物与模板复性所需要的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度。引物长度越短，引物中G+C的含量越低，所需的退火温度越低。虽然降低退火温度可能增加扩增产量，但引物与模板间的错配现象也会增多，导致非特异性扩增上升。
