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pbsr怎么配?
PBS作为生物实验中最常用的试剂,相信很多小伙伴都配置或者实验使用过。PBS是磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline),一般作为溶剂,起溶解保护试剂的作用。一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。它具有盐平衡、可调整适宜pH、可以缓冲pH等特点。
PBS、蒸馏水和生理盐水三种溶剂该怎么选择呢?
蒸馏水不具有盐平衡作用,可以破坏生物蛋白的结构及生物特性;而生理盐水不具有调整pH的作用,对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应。
在实验室也常见PB、PBST溶液。PB溶液的成分通常有磷酸钠和磷酸钾。若只是化学反应,用PB溶液就行。在PB的基础上按照一定比例加NaCl,就可配置PBS;将磷酸钠和磷酸钾,NaCl,Tween-20按照一定比例,即可配成PBST溶液。
PBS配置过程
第一步,准备洗干净的瓶子和配置PBS所需的纯水。
第二步,根据所需要的PBS浓度确定各成分需要的量,不同实验室要求不一样,所以成分及用量会有区别。以我们细胞部门为例,我们配置的PBS成分如下:
试剂名称g/LKH2PO40.144NaCl9.0Na2HPO40.421
第三步,将称取的药品加入纯水搅拌至完全溶解。
第四步,将溶液pH调整至7.4左右。这里不同实验对溶液pH要求不一样,细胞部门主要是用于胰酶消化细胞,胰酶在偏碱性环境活性会强一点,所以细胞部门的pH可以稍微偏高一点,一般实验使用的话调整pH 7.2-7.4即可。
第五步,将配好的溶液定容到所需的体积,然后高温高压灭菌或者0.22um滤膜过滤除菌。时间充足的小伙伴可以高温高压灭菌,比较着急用的小伙伴可以直接0.22um滤膜过滤,其实效果是一样的。
第六步,等灭菌的PBS温度降下来或者过滤了就是无菌的PBS了,拧紧瓶盖,封上封口膜,就可以放在4度冰箱备用了。
为啥要稀释核酸样本?
稀释核酸样本有两个原因:
1)比赛按捺比较明显,应稀释比赛物;
2)以下降非特异性反应,使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。
血清稀释用一般的PBS即可,可加1%的BSA,能有用下降ELISA本底,当然假设你嫌费事我觉得用生理盐水代替PBS也不大。不管你是用直接比赛仍是直接比赛,血清的稀释倍数必定要事前判定,但也不必一点点,你做一个预实验即可,选择OD在1.0左右的稀释倍数,即你的比赛ELISA中阴性孔OD在1.0,这样作出来的曲线比较灵敏。
pbs怎么配?
pbs是phosphate buffered saline缩写,翻译过来就是磷酸缓冲盐溶液
配制方法称取8.0g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4溶于800mL蒸馏水中,用HCl调节溶液至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可得0.01M PBS缓冲液。
作用PBS是磷酸缓冲盐溶液的简称,不仅伪狂犬病毒要用它稀释,一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用,蒸馏水不具有盐平衡作用,可以破坏生物蛋白的结构及生物特性;生理盐水不具有调整pH的作用,对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应,所以使用PBS是首选。
抗原试液是由什么做的?
抗原试液是由多种成分混合而成的 其中包括添加到试液中的特定抗原制品、稳定剂、缓冲剂等,以保证试剂的稳定性和准确性 此外,抗原试液的具体成分还会因具体使用目的而有所不同,比如在血液检测中所用的抗原试液通常会加入辅助试剂以增加检测的灵敏度和准确性
活死细菌荧光染色步骤?
活死细菌荧光染色是一种常见的细菌检测方法,以下是大致步骤:
1. 准备工作:从细菌培养基中取出待检测的细菌,并用生理盐水或PBS缓冲液洗涤3次,将细菌悬浮在缓冲液中。
2. 制备荧光染色液:荧光染色剂通常使用DAPI(4′,6-二氨基-2-苯基吡啶)或荧光素,根据实验需要调配荧光染色液,可以根据染色试剂包装说明或文献方法进行制备。
3. 染色:把细菌悬液和制备好的荧光染色液混合,并在室温下混匀静置,通常需要10-30分钟的染色时间。具体时间可以根据实验制定的方案来决定。
4.洗涤:染色后需要用PBS缓冲液洗涤1-3次,去除未与细菌结合的荧光染料,将细菌洗涤后放入载玻片中。
5.观察:将载玻片放置在荧光显微镜上,使用荧光设置观察细菌,可以看到发出绿色或蓝色荧光的细菌。
需要注意的是,活死细菌荧光染色操作需要具备较高的实验技能和操作规范,严格遵守消毒流程和安全操作规范,以防止对个人和环境的危害。